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当前位置:水产资料 → 斜带石斑鱼烂身病原分离 今天是:2018-10-21 星期日

市文联赴广东调研体制外文艺工作者服务管理经验

出处:水产前沿 作者:黄广富 秦波 毛毛 中国水产养殖网 2018-10-21 23:35:00

采集具有典型烂身症状的斜带石斑鱼、健康斜带石斑鱼、未发病池水和常用商品化治疗药品以进行病原分离鉴定和药敏分析,为该病病原确定和治疗提供理论基础和实践指导。

斜带石斑鱼为福建省沿海养殖主要经济品种之一,由于近年来养殖户过度追求经济效益,伴随着养殖规模的扩大经常出现暴发性死亡现象。近年来每到5-10月份高温季节,斜带石斑鱼在幼鱼到成鱼阶段出现一种“烂身病”,特别是在幼鱼阶段,会引起大量死亡,给福建沿海斜带石斑鱼养殖业带来巨大的经济损失。
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发病斜带石斑鱼,左为表皮轻微溃烂,右为严重至肌肉溃烂

2015年9月份在福建省漳浦县深土镇某石斑鱼养殖场暴发“烂身病”,患病鱼规格在7cm左右,烂身程度不一,轻者鳞片脱落从表皮开始溃烂直至真皮,重者肌肉发生溃烂露出脊椎骨。重度感染的斜带石斑鱼出现游动缓慢,体表发黑,抵抗力低等症状,死亡率高达80%以上。为了确定“烂身病”发病原因和治疗方案,从该石斑鱼养殖场采集具有典型烂身症状的斜带石斑鱼、健康斜带石斑鱼、未发病池水和常用商品化治疗药品以进行病原分离鉴定和药敏分析,为该病病原确定和治疗提供理论基础和实践指导。

一、病原分离纯化

使用70%的酒精棉球对患病斜带石斑鱼非溃烂部位进行消毒,用火焰灼烧过的接种环挑取溃烂处少许组织于海水配制的BHI固体培养基上进行划线,37℃培养18h。根据培养结果挑取优势单菌落重新进行划线,同样条件培养后使用革兰氏染色确定是否有杂菌污染,结果表明优势菌呈现红色,形态为杆状并且具有一定的弧度。将纯化后的单菌落在含有2% NaCl的BHI液体培养基中37℃、200r/min培养18h后用于后续实验。
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分离的病原菌经革兰氏染色呈现红色,形态为杆状并且具有一定的弧度

二、病原菌的鉴定

将所得病原菌对健康斜带石斑鱼以口腔注射、腹腔注射和创伤浸泡进行人工感染,使用所取未发病池水在诏安神爽动保技术服务中心循环水系统暂养。一个星期内发现三种感染方式均能使斜带石斑鱼患“烂皮病”,创伤浸泡形成烂皮数量最多,其次腹腔注射,最后是口腔注射。使用16s rDNA通用引物:27F(5’- AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3’),1492R(5’- GGT TAC CTT GTT ACG ACT T-3’)对所筛选病原菌进行分子生物学鉴定,将所得序列通过BLAST工具进行比对,与哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)的相似度为99%。

三、药敏实验

1、四种常用消毒剂的对比实验

选取福尔马林(有效成分:37%-40%甲醛)、金碘(有效成分:聚维酮碘)、绿安(有效成分:月苄三甲氯铵)、卫捷(有效成分:戊二醛、苯扎溴铵)四种常见消毒药使用牛津杯法进行药敏实验。吸取100μL培养后的病原菌液均匀涂布于使用海水配制的BHI固体培养上,然后将用双蒸水稀释后的不同消毒药(2% W/V)100μL打入牛津杯中,共做六个平行,37℃培养18h后观察抑菌效果。实验结果显示,病原菌对福尔马林最为敏感,抑菌圈直径在30mm左右,其次是金碘,抑菌圈直径在17mm左右,最后是卫捷,抑菌圈直径在15mm左右。通过六组实验表明绿安对病原菌并不敏感,没有发现明显的抑菌圈。

2、五种抗生素药品对比实验

选取强力泰(有效成分:恩诺沙星)、呼乐芬(有效成分:氟苯尼考)、日本黄粉(有效成分:呋喃苯烯酸钠)、鱼血安(有效成分:盐酸环丙沙星、盐酸小檗碱)以及呋喃西林五种抗生素,同样使用牛津杯法进行药敏实验。称取每种抗生素0.2g溶于50mL生理盐水中配制成4g/L浓度的溶液。吸取100μL培养后的病原菌液均匀涂布于使用海水配制的BHI固体培养上,然后吸取100μL相应的抗生素溶液于牛津杯中,连续做六个平行。37℃培养18h后观察抑菌效果。结果显示,五种抗生素药品均对病原菌具有抑制作用,病原菌对日本黄粉最为敏感,抑菌圈直径为35mm左右,呼乐芬次之,抑菌圈直径为27mm左右,鱼血安和强力泰抑菌效果相似,抑菌直径分别在22mm和20mm左右,呋喃西林的抑菌效果不太稳定,抑菌圈直径在18mm左右。

四、防治建议

根据所得实验结果证明哈维氏弧菌是引起斜带石斑鱼烂身并且大量死亡的主要病原,因此很有必要进行药敏实验筛选一种合适的内服药和一种水体消毒剂来对石斑鱼“烂身病”进行防治,以减少石斑鱼养殖户经济损失。

通过对市面上常见的水体消毒剂福尔马林、金碘、绿安和卫捷四种药物的药敏结果发现福尔马林的抑菌效果最强,金碘效果次之。但是由于福尔马林对人体及石斑鱼具有一定毒副作用,安全性方面相对于金碘略有差距。因此综合考虑对于外泼消毒剂以金碘(有效成分:聚维酮碘)最为合适。

对比五种抗生素药敏实验结果,发现病原菌对日本黄粉最为敏感,但是属于硝基呋喃类的广谱抗菌药物,对人体具有潜在的致突变和致癌性,不推荐使用。呼乐芬、鱼血安和强力泰等三种抗生素安全性较高,可以作为防治石斑鱼“烂身病”的内服药,根据抑菌效果建议优先选择呼乐芬(有效成分:氟苯尼考)。

笔者根据实地考察,发现部分石斑鱼养殖户为了过高追求经济利润,养殖密度不断提高,在高温季节时一旦养殖水体出现恶化,引起“烂身病”的哈维氏菌将持续增殖,最终导致养殖的石斑鱼大量死亡。因此通过搭设遮阳网控制好养殖池中水体温度和调整养殖密度,能够有效的预防石斑鱼“烂身病”的发生。对于已经发病的养殖池不要盲目的使用市面上的药品,只有科学合理的使用水产药物才能在实际养殖生产中更好的防治石斑鱼“烂身病”,引导水产养殖业健康持续发展。


来源:水产前沿(微信号:fishfirst)
作者:福建大北农水产科技神爽动保技术服务中心 黄广富 秦波 毛毛

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